Table 2 Primer sets for PCR amplification of FVBD agents

Anaplasma spp./Ehrlichia spp.

16S rRNA

EHR16SD: 5′-GGT ACC YAC AGA AGA AGTCC-3′

345

95°C, 5 min; 35 cycles [94°C 30 sec, 55°C 30 sec, 72°C 90 sec]; 72°C, 5 min

[12]

EHR16SR: 5′-TAG CAC TCA TCG TTT ACAGC-3′

Babesia spp.

18S rRNA

PIRO-A: 5′-AAT ACC CAA TCC TGA CACAGG G-3′

400

95°C, 5 min; 35 cycles [94°C 30 sec, 55°C 30 sec, 72°C 90 sec]; 72°C, 5 min

[13]

PIRO-B: 5′-TTA AAT ACG AAT GCC CCCAAC-3′

Bartonella spp.

16S-23S rRNA

325 s: 5′-CTTCAGATGATGATCCCAAGCCTTCTGGCG-3′

500-800

95°C, 5 min; 55 cycles [95°C 15 sec, 66°C 15 sec, 72°C 15 sec]; 72°C, 1 min

[14]

1100as: 5′-GAACCGACGACCCCCTGCTTGCAAAGCA-3′

B. burgdorferi s.l.

5S-23S rRNA

Outer primers:

380

[15]

23SN1: 5′-ACCATAGACTCTTATTACTTTGAC-3′

94.5°C, 1 min; 25 cycles [94°C 30 sec, 52°C 30 sec, 72°C 1 min]; 72°C, 5 min

23SC1: 5′-TAAGCTGACTAATACTAATTACCC-3′

Inner primers:

225

23SN2: 5′-ACCATAGACTCTTATTACTTTGACCA-3′

94.5°C, 1 min; 40 cycles [94°C 30 sec, 55°C 30 sec, 72°C 1 min]; 72°C, 5 min

5SCB: 5′-biotin-GAGAGTAGGTTATTGCCAGGG-3′

Hepatozoon spp.

18S rRNA

HEP-F: 5′-ATA CAT GAG CAA AAT CTC AAC-3′

626-666

95 °C, 5 min; 34 cycles [95 °C 20 sec, 55 °C, 30 sec, 72 °C, 90 sec]; 72 °C, 5 min

[16]

HEP-R: 5′-CTT ATT ATT CCA TGC TGC AG-3′

Leishmania spp.

Small subunit rRNA

Outer primers:

603

[17]

R221: 5′-GGTTCCTTTCCTGATTTACG-3′

94°C, 5 min; 35 cycles [94°C 30 sec, 60°C 30 sec, 72°C 30 sec]; 72°C, 10 min

R332: 5′-GGCCGGTAAAGGCCGAATAG-3′

Inner primers:

358

[18]

R223: 5′-TCCCATCGCAACCTCGGTT-3′

94°C, 5 min; 35 cycles [94°C 30 sec, 65°C 30 sec, 72°C 30 sec]; 72°C, 10 min

R333: 5′-AAAGCGGGCGCGGTGCTG-3′